A magyarázat a tanár

A módszer a tanulmányok, valamint iránymutatások a témában.

Tárgy 16. A titrálási vírusok

Feladat a következő leckét.

Összefoglalva az ülésen.

Annak meghatározására, az antitestek jelenlétét a szérumban a nyúl vért Newcastle-betegség-vírus.

Önálló munka: a) az Öböl-agar diák; b) termelő lyukakat egy réteg agar; c) kiömlés RDP komponenseket; d) a nedves fogaskerék kamrát; d) vázlat DSA rendszer notebook; e) nyilvántartást eredményeit RDP és RDP belép a rendszerbe a következő napon vagy a következő leckét.

1. Mi az az elv, RDP?

2. Milyen problémákat megoldani RDP?

3. Mik az előnyei és hátrányai RDP?

A cél az osztályok: bevezetés a módszer titrálás vírusok

Berendezés és anyagok: a feladat, hogy meghatározzuk a vírustiterí az ED50 tényleges adatok alapján, rajzolt kártyák (minden hallgató egy kártyát, minden legalább 10 változatai feladatok); allantois-folyadékot csirke embriók fertőzött Newcastle-betegség; 1% -os szuszpenzióját mosott csirke vörösvérsejtek; sóoldatot (izotóniás NaCl-oldat); Plexiüveg panel lyuk; beosztott pipetta 1 ml; gumi körte; töltött fertőtlenítő oldat; ceruzák írásra üvegre, számológépek, logaritmikus asztalok, multimédiás eszközök, előadások, MS Office Power Point, a téma a foglalkoztatást.

A laboratóriumi munka vírusok biofabrichnom termelés és állatorvosi gyakorlatban gyakran kell meghatározni a vírus mennyiségét az adott anyag. E nélkül a meghatározás lehetetlen kísérletileg vírusokkal fertőzött élő laboratórium rendszerek, az élő és inaktivált vírust tartalmazó vakcinák és diagnosztikai termékek, tevékenység értékelése élő vírus vakcinák előállítására Immunszérumok és sok egyéb alkotások.

A vírus mennyiségét bármely anyag határozza meg a vírus titer ebben az anyagban. Az vírustiterszint megértse kifejezése koncentrációja az anyagban.

A vírus titerét - ez a vírus mennyiségét az egység által tartalmazott anyag mennyisége. Mivel a vírus mennyisége nem lehet kifejezett általánosan használt (térfogat, súly és így tovább. N.) egységek, igénybe a mérési egységekben fellépés vagy aktivitási egység. És a fertőző vírusok hemagglutinációs aktivitás. Ennélfogva, az egység a vírus mennyisége fertőzések és hemagglutinációs.

A dimenziója ezen egységek zivisit teljes és az arány a hibás virionok használt szuszpenzió objektumot titrálási módszer, és más tényezők. A gyakorlatban azt használják háromféle egységek számát a vírus: 1. - fertőző egységek a helyi károkat okozott vírusok és értékelni, mint egy egyszeri hatás; 2. - fertőző egység 50% vírusok az érzékeny élő objektumok statisztikailag értékeljük; 3. - hemagglutináló egység.

A helyi romlás vírusok által okozott, a legismertebb plakkok fertőzött sejttenyészetekben (szigetecskék egy réteg elhalt sejtek életben), és pockmarks (nekrotikus csomók) a HAO csirke embriókat fertőzött és néhány egyéb himlő vírus. Azokban az esetekben, az ilyen megnyilvánulások fertőző aktivitásának a vírus vírus mennyisége mérhető a plakk-képző egység (pfu) vagy ospoobrazuyuschih egységek (OOE). Egy PFU egy adag vírus képződését okozhatja a lepedék és egy OOE - egy pockmarks.

A legsokoldalúbb meghatározásának módszere a vírus titer egységekben 50% fertőző lépéseket. Ezen eljárás szerint, egységnyi mennyiségű vírus kerül elfogadásra olyan dózis, amely képes előidézni a fertőző hatást 50% A beoltott vizsgálati tárgyakat. A vegyületet ED50 - 50% -os hatásos dózist. A dózisok számát vírus egységnyi anyag térfogata, és expresszálják a vírustiter az anyagban.

Típusú vírusok egység által meghatározott 50% -os fertőzés akció

Típusú fertőzések vírusok

Mivel a teszt tárgyak laboratóriumokban tipikusan fehér egerek, csirke embriókat és sejtkultúrák, amelyben a vírus fertőző fellépés megnyilvánulhatnak halált, a klinikai tünetek és a változások pathoanatomical citopátiás hatást. Minden egyes vírus kiválasztott érzékenységnek a vizsgált tárgy és annak eredménye fertőzőképes keresetet, amelyben a hatás a fertőzés értékeljük. Attól függően, hogy milyen típusú vizsgálati tárgy és a formák fertőző cselekvési ED50 veszi az alábbi típusok 6. táblázatban mutatjuk be.

1 egy LD50 dózis vírus, amely 50% -át elpusztítja laboratóriumi állatok (rendszerint fehér egerek);

ID50 -Dose 1 vírus okozza a klinikai tünetek vagy a patológiás változásokat 50% fertőzött laboratóriumi állatok;

ELD 1 - egy adag vírus, amely 50% -át elpusztítja csirkeembriókból;

1 -Dose EID50 vírust elváltozásokat okoznak 50% fertőzött csirke embriókat;

TSPD50 1 - egy adag a vírus okozó citopatikus hatás 50% fertőzött sejttenyészetek (tipikusan csövek, sejttenyészetek).

Száma ED50 (LD50. ID ELD50. EID50 vagy TSPD50) vírus egységben foglalt térfogatú vírus-tartalmú anyagot, és lesz a kifejezést titer (T) a vírus ebben az anyagban. Például, a T = 10 3,48 TSPD50 / 0,1 ml azt jelenti, hogy minden egyes 0,1 ml vírus-tartalmú anyagot tartalmazza 10 3 '48 -as dózisban a vírus (m. E. Több mint 1000, de kevesebb, mint 10.000, nevezetesen a 10 3 48 = 3020), amelyek mindegyike képes indukálni egy citopatikus hatás 50% kémcsövek a kultúra sejtek.

Az említett egységek 50% -át a vírus fertőzés (LD50. ID50. ELD50. EID50. TSPD50) alkalmazunk abban az esetben, a fertőző értékelését a vírus statisztikailag értékeljük a hatást zajlik, amikor tartva fertőzés a vírus által hordozott letális hatás, a klinikai tünetek, patológiás változások vagy sejtkárosító hatását.

Titrálás vírus, amelyet 50% -os fertőzöttség intézkedés - a legsokoldalúbb a technika alkalmas szinte bármilyen vírustitrálást, ha felveszi az érzékeny rá az élő rendszer (szöveg objektumot). Azonban ez a vírus titrálási módszer meglehetősen időigényes, és előírja a hosszú statisztikai számításokat.

A probléma meghatározásának a vírus titer egységekben 50% fertőző fellépés (LD50. ID50. ELD50. EID50. TSPD50) csapódik le, hogy megtalálja egy hígításban levő vizsgálandó vírus-tartalmú anyag mennyiségének fertőző dózis, amely tartalmazhat egy ED50. majd kiszámítja, hogy hány egységnyi vírust tartalmazott azonos térfogatú vírust tartalmazó anyag, amely azt jelzi, vírustiterí ezt az anyagot.

A probléma megoldására, az első a vizsgált vírus-tartalmú anyagot állítunk elő egy sorozat egymást követő 10-szeres hígítás. 10-szeres hígításban a töltés, két okból:

Először is, ahogy egy grafikonja egy fertőző vírusdózisok (ábra. 35), a görbe a függőség közel az a pont megfelelő ED50. egy jelentős intervallum közelít egy egyenes vonal.

35. ábra egy grafikon a hatását fertőző dózis a vírus

Ez azt jelenti, hogy bizonyos határokon belül, amelynek központja van ED50. logaritmusa közötti a dózis (hígítás) a vírus és a fertőző hatás akkor létezik, egy egyenes vonalú kapcsolat, azaz, a mennyisége fertőző hatás logaritmusával arányos a dózis a vírus (vagy hígításával) az alacsony, és különösen magas dózisú ez a függés törött ..;

Másodszor, a 10-szeres hígítást megkönnyíti az ezt követő számítások.

És egyenlő térfogatú 10-szeres hígítású vizsgálandó beoltott vírus-tartalmú anyagot egyenlő csoportba érzékenyek a vírus élő vizsgálati tárgyak (egerek, csirke embriókat vagy sejttenyészetek). Így minden csoportban legyen legalább 4-6 vizsgálati tárgyakat, mivel kevesebb statisztikailag kiszámított érték vírustiterszint lesz túl sok hiba (statisztikai érték pontosabb, mint a nagyobb mennyiségű kiindulási adatok alapján).

A fertőzés után a vírus véve az az intézkedés eredményeként (halál, a klinikai tünetek, kóros elváltozásokat, vagy CPE) a fertőzött objektumokat és meghatározza, hogy mely hígulás a vírus hatékonynak bizonyult 50% -a érzékeny tárgyakat. Hígítás, amely 50% -os hatást interpolálva számítjuk ki egyenes vonalú. Amikor ilyen hígítás találtuk, úgy tekinthető, hogy a térfogata fertőző vírus hígított talált (megfelel 50% -os hatást) számú alkalommal, tartalmaz 1 ED50. Ugyanebben a képernyőn forrás (hígítatlan) vírust tartalmazó anyagot az ilyen dózisok (ED50) tartalmaz több, mint ahányszor a dolgokat hígítottuk, 1 adott ED50. Ezután alakítjuk, mint például egységek 50% fertőzés a vírus tartalmazza egységnyi térfogatban (ml) vírus-tartalmú anyag, amely lehet egy expressziós a vírustiter az anyagban.