Eljárás gátlására hemolitikus aktivitását a patogén törzsek E. coli

A találmány a gyógyászat és fel lehet használni, hogy elnyomja a hemolitikus aktivitását patogén E. coli törzsek. A beteg egy elektrolitikus ezüst oldat koncentrációban 0,5-5,0 mg / l 2-9 napig. Oldatot használunk mind önállóan, és egyidejűleg antibiotikummal. A módszer lehetővé teszi, semlegesítik a hemolizin patogén E. coli törzsek. Ez növeli a kezelés hatékonyságát. 2 ZP f háttere 3. táblázat.

A találmány a gyógyászat, állatgyógyászat, mikrobiológia, és fel lehet használni, például a műtét és a mezőgazdaságban kezelésére például gennyes sebészeti fertőzések és azok szövődményei a mikroflóra rendelkező hemolitikus aktivitást.

Az ügy sürgősségére való tekintettel annak a ténynek köszönhető, hogy jelenleg nincs olyan gyógyszerek, amelyek antihemolytic aktivitással rendelkeznek, és használják az orvosi gyakorlatban, míg például az egyik legfontosabb tényező -gemolizin patogén E. coli. A hemolizin-termelő törzsek gyakran különböztetni a betegek húgyhólyag fertőzések, bakterémia, szepszis, meningitis, és szinte nem detektálható normális emberi széklet flóra (2).

Az a képesség, sok E. coli törzsek okozzák hemolízist emberi és állatok jelenléte miatt a sejtek az E. coli -gemolizina toxinját kódoló gén fehérjét tömege 107 kD. Az említett toxin képes nem csak lizálják vörösvértestek, hanem károsítja sejtmembránok citopatikus hatásokat a vese epiteliális sejtek, idegsejtek, leukociták, fibroblasztok, monociták (1, 2, 5).

Hemolizinrésze a legalaposabban tanulmányozott toxin (3, 7). De még kevéssé ismert és kidolgozott, hogyan csökkenthető a hemolitikus aktivitás és semlegesíti a kóros hatása a toxin.

Számos más, a hemolizin anyagok, amelyek gátolják a cselekvés és így a megelőzésére hemolitikus hatást. Így gátolja a lecitin hemolizinek streptococcusok az A és B csoport (4), és az aktivitást a staphylococcus -toksina és b-lizin rohamosan csökken alacsony koncentrációjú foszfatidil-kolin. A sztafilokokkusz delta toxin nem mutatja hemolitikus tulajdonságok a természetes foszfolipidek jelenlétében (9). Szerint O. Tsiganova foszfolipidek hemolizinek szuppresszió mechanizmusa az sérti toxinok kölcsönhatás eritrocita membrán (8). Az egyik legaktívabb inhibitorok hemolízis koleszterin inaktiváló hemolizin Yersinia pestis, O2 -labilnyh hemolizinek (9). Számos vegyület megakadályozza a fixálási folyamat hemolizinek staphylococcusok célsejteken - ez konkovalin tannin (kötődést megakadályozó -toksina aureus); gangliozidok Gti és Gdta.

Ami -gemolizina E. coli, a gátló hatás hemolízis hatása alatt a toxin EDTA-t és néhány helyi érzéstelenítők (10). Ezek az anyagok nem lehet széles körben használják a klinikán, hogy blokkolja a hemolitikus reakciók van egy sor mellékhatások, és nem jelenti a bakteriális fertőzések kezelésében (6).

Ezzel kapcsolatban az észlelési anyagok, amelyek megakadályozzák a fejlesztési hemolitikus reakciók, nem csak lehetővé teszi, hogy dolgozzon ki lehet kezelni a hemolitikus törzsekhez, hanem vezet, hogy értik a kémiai természete, a hatásmechanizmusok és interakció méreganyagok sejteket.

Ismert gátlására szolgáló eljárás hemolitikus aktivitását Escherichia coli által elektrolitikus nátrium-hipoklorit oldatot (Petrosyan EA és mtsai., "Effect of elektrokémiai oxidációját bizonyos tulajdonságait az E. coli." Rep., Proc. Scien. Tr. "Akut enterális fertőzések", L. 1988 Vol. 12, pp. 57-59). A módszer által elfogadott minket, mint egy prototípus. Ez a módszer azzal jellemezve, hogy az E. coli kezelés után egy elektrolitikus nátrium-hipoklorit-oldat elveszíti a képességét, hogy indukálja a hemolízis eritrociták. Azonban, a hiányosságokat a folyamat között az a tény, hogy a nátrium-hipoklorit önmagában is okozhat hemolízist eritrociták.

A jelen találmány kiküszöböli a nemkívánatos mellékhatások más hatóanyagok, és fokozza kitettség hemolitikus aktivitását Escherichia coli alkalmazásával elektrolitikus ezüst oldatok koncentrációja 0,5-5,0 mg ezüst / liter.

A célkitűzések a találmány szerinti: A készítmény licit -gemolizina szuppresszáló aktivitása, amely a fő tényező a patogenitás E. coli, ezáltal csökkentése komplikációk, súlyosságának csökkentésére és a kezelés időtartamát a gennyes sebészeti folyamatok okozta E. coli.

A találmány abban áll elnyomja a hemolitikus aktivitását patogén E.coli törzsek bevezetésével ezüst elektrolit oldatok koncentrációjú 0,5-5,0 mg ezüst / liter. Az expozíció végezhetjük kombinálva más gyógyszeres terápia és önadagolását elektrolitikus ezüst oldat. A kezelés időtartama határozza meg a klinikai kép a betegség, és 2-től 9 nap. Tekintettel a ártalmatlanságát a készítmény (12) szerinti jelzések kezelés folytatható.

Az eljárást a következőképpen hajtjuk végre.

A bakteriológiai vizsgálat határozza jelenlétében E. coli, amelynek hemolitikus tulajdonságok. Elektrolitikus ezüst oldat koncentrációban 0,5-5,0 mg / l intravénásan naponta egyszer, és (vagy) az öntözés sebet naponta kétszer végzett kezelés során antibiotikum. Amikor intravénásán adjuk be elektrolitikus ezüst sóoldat térfogatban 500 ml.

Annak bizonyítására, a hitelességét csökkentve a hemolitikus aktivitás A mikroflóra használt Escherichia coli-törzsek, amelyek plazmid hemolízis. A jelen vizsgálatban általunk használt plazmid PRD l / 13,1 MD /, amely a hemolitikus meghatározó természetes plazmid pSF200 Hly 212 vektorba klónozzuk pBR325 (5,11). Volt 8-10-szer több hemolitikus aktivitást, mint a vér szerinti szülő törzs. PRDI plazmidot bevittük az E. coli törzsbe DH1 (F, rec Al és Al, Gyr A96, thi-1, hsd 17 (RC, mc +), sup E 44, rec A 1. -) (10) transzformációval. A törzs növekedését használt hús-pepton húsleves és sima agar, M9 tápközegben.

Meghatározása A hemolitikus aktivitás a következők szerint végeztük.

Előállítása 1. eritrocita-szuszpenziót: nitrát nyúl vért háromszor mostuk izotóniás nátrium-klorid. A zagyot bevisszük a eritrocita vörösvértest-puffer: 10 mM Tris-HCI, 7,5 10 mM kalcium-klorid 0,9% NaCl, hogy a koncentráció 1%.

2. Egy éjszaka tenyésztett törzs a BCH pRD1 neveltük az exponenciális növekedési fázisban (OD 540 = 0,5).

3. A sejteket ülepítjük kultúra egy centrifugában 3000. 15 percig, és a felülúszót tartalmazó -gemolizin vizsgáltuk hígítási módszerrel, hemolitikus aktivitás.

4. A felülúszót pRD1 / DH1 folyékony tenyészet hígítottunk kétszeres hígításban a húslevest, majd hozzáadunk 1% eritrocita-szuszpenziót. Az elegyet 1 órán keresztül inkubáltuk 37 o C-os vízfürdőben. Kontrollként szolgált tartalmazó csöveket az eritrocita szuszpenzió felülúszó nélkül (K), és 1/2 V eritrocita szuszpenzió felülúszó nélkül (50 K).

5. Mérési sejtsűrűség megmaradt eritrocitákat hajtjuk spektrofotométerrel (OD-620 nm) (5, 7).

6. kifejtett hatásának meghatározására ezüst a hemolitikus aktivitásra adagolunk-elektrolit ezüst oldat koncentrációban 0,1; 0,25; 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6 mg / l.

A kísérletek eredményei segítségével az elektrolit oldat ezüst koncentrációban 0,5 mg / l az 1. táblázatban megadott.

A hemolitikus aktivitást a minták fejezzük tetszőleges hemolitikus egység (HU), amely szerint határozzuk meg az utolsó hígítás, amelynek van 50% Az eritrociták lízisét (11).

Amint a táblázatból látható, a felülúszót aktivitás jelenlétében ezüst elektrolit oldatok (kezdeti koncentráció - 0,5 mg / l), kifejezve nem, ez - HU 8 és eltér a kontroll, ahol a hemolitikus aktivitás 128-256 HU. Következésképpen, nem volt egy éles csökkenést a képességét, E. coli -gemolizina lizálására vörösvértestek jelenlétében ionok Ag ++. A 2. táblázat mutatja az eredményeket a hemolitikus aktivitás megváltoztatja patogén E. coli törzsek hatása alatt különböző koncentrációinak elektrolit oldatok ezüst: 0,1; 0,25; 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6 mg / l.

Ebből arra lehet következtetni, hogy az elektrolit oldat ezüst olyan anyag, amely képes megakadályozni a eritrociták lízisét patogén E. coli, viselő hemolitikus meghatározó. A mechanizmus Ezen intézkedés nem ismert, de az ezüst elektrolit oldat, amelynek a pozitív töltés, konformációjának a megváltoztatásával a az aktív hely -gemolizina amely zavarja a kölcsönhatás a toxin célsejt-membránhoz, és a csatornák kialakulását. Nem lehet kizárni a befolyása a gyógyszer hatása a membrán a vörösvértestek, amely elvezet a mérése a díjat a felszíni struktúrák részt vesznek a recepción a toxin.

Semlegesítés A toxikus hatások az elektrolit oldat -GEMOLIZINA SILVER kísérleteket végeztünk egereken tömegű 20-30 g-ot használtunk a két állatcsoport, egyenként 15 állatot.

I sorozat. És 5 egereket injektáltunk a tenyészet folyékony felülúszót PRDI (OH1) át glyukozomineralnoy közepes Mg (összetétele g NH4Cl - 1,0; NaCl - 0,5; NaHPO - 6,0; KHPO - 3,0; MgSO - 0,2 ; glükóz 4,0; desztillált vízzel 1000; pH = - 7,2) - mennyiségben 500 mikroliter intraperitoneálisan.

II sorozat. Egymás után beadagolunk 500 mikroliter felülúszó és 35 mikroliter elektrolitikus ezüst koncentrációjú oldatot 0,5 mg / l).

III sorozat. 500 mikroliter M9 + 35 mikroliter NaCl.

A kísérletek eredményeit a 3. táblázat tartalmazza.

Amint a 2. táblázatból látható, az elektrolit oldat ezüst okozott fokozott túlélése az előkezelt egerek intraperitoneálisan tartalmazó felülúszót -gemolizin. Ez azt jelzi, hogy az elektrolitikus ezüst megoldások antigemolicheskoy aktivitást és lehet használni, hogy által okozott fertőzések kezelésére hemolitikus törzsek az Escherichia coli.

A módszert tesztelték klinikai körülmények 5 betegben. Így az egyik esetben, az elektrolitikus oldatok ezüst intravénásán adtuk, és egyidejűleg végzett mosás a hasüregben.

1. példa A beteg 62 éves a tumor végrehajtott eljárás subtotalis gastrectomia és proximális eltávolítását a hasnyálmirigy farok. A posztoperatív időszakban bonyolította fejlődésének fizetésképtelenségi duodenum ízületek, peritonitis, tályogképződés a hasüreg és a fejlesztés a szeptikus körülmények között. Antibiotikum-kezelés, beleértve a penicillin, ampicillin, kefzol, tseporin iránt nincs hatása. Bakteriológiai kutatás kimutatta, levehető hasi E. coli, amelynek hemolitikus tulajdonságok és nem érzékeny az antibiotikumokra. Az egészségügyi rendelt intravénás beadását 500 ml elektrolit oldat az ezüst sóoldattal (koncentráció 5 mg / l) végzett kezelés során 12 Mill. U. penicillin naponta. Két napon belül a hőmérséklet normalizálódik. Bevezetés ezüst elektrolitikus oldat 9 napig tartott. A 12. napon a beteg állapotának megfelelő volt.

2. példa A beteg 65 éves cukorbeteg, amputáció a lábszár a műtét után a felső harmadik, gyártott mintegy üszkösödés kifejlesztett gennyes sebek és a szeptikus állapotban. Vetés a seb jelenlétét mutatta a hemolitikus E. coli törzs. Az antibiotikumok nem hozott pozitív hatást. Címzett intravénás beadása 500 ml elektrolit oldat az ezüst sóoldattal (koncentráció 0,5 mg / l). 3 nap alatt a hőmérséklet normalizáltuk. Bevezetés elektrolitikus ezüst oldatot 2 napon át folytatjuk. Egyidejűleg 2-szer naponta végezzük seb öntözés elektrolízis ezüst oldat. A beteg állapota stabilizálódik. A seb tiszta volt, és ezt követően a beteg volt, lemerült megfelelő állapotban.

A módszer újdonsága az, hogy a használata elektrolitikus ezüst oldatok előállítását teszi lehetővé váratlanul magas pozitív hatása miatt a kombinált alkalmazása az antibiotikumok és ezüst elektrolit oldatok vagy külön készítményben.

Így a javasolt módszer lehetővé teszi, hogy hatékonyan befolyásolja a mikroflóra rendelkező hemolitikus aktivitás, ami jelentős súlyozást a mögöttes folyamat. Egy módszer alkalmazható az orvosi gyakorlatban, hogy semlegesítse a kölcsönhatás a patológiás reakciók N1u ​​+ E. coli törzsek a test a beteg, hogy alkalmazni rendelkezésre olcsó és hatásos anyag, amely gátolja a hemolizin. A módszer kiküszöböli a lehetséges szövődmények, és jelentősen csökkenti a kezelés idején.

IRODALOM 1. Hugnes C. D. Muller, J. Hacher és W. Loebel 1982 genetikai és patogenetikai szerepe Escherichie coli hemolizin. Toxican 20, p. 247-257.

2. H. W. Smith, a H. B. Huggins. A toxikus szerepe Alphahaemolisin patogenezisében kísérleti E. coli fertőzés ellen egerekben. J. Gen Microb. 1985, 131, p. 395-403.

3. J. Hacher, H. Hof, L. Emody és Loebel. Befolyásolja a klónozott Escherichia coli haemolisin Henes, S. fimbria és a szérum ellenállás patogenitása ditterent állatmodellekben. Microbiol. Patogenezis, 1986, N 1, p. 1533-1547.

4. Bornside Kr. Bois P. Coch J. Hemoglobin és az E. coli, a letal intraperitoneális complination. J. Bacteriol. 1968 N 5, p. 1567-1571.

5. Rault M. M. Stuning és W. Konig. Anyagcseréje leukotriének által 1-glutamil és dipepsidase humán polimorphonu egyértelmű granulocites. Immunology, 1985, N 55, p. 135-137.

7. Mackman N. Holland J. B. Szekréciója egy 107 dalton molekulatömegű polipeptid a tápközegbe egy haemolytise E. coli K 12 törzs Mol Gen Jenet. 1984 193, p. 312-315.

8. OI Tsyganov. Bakteriális hemolizin és azok kapcsolatát a virulencia. Stavropol. MM 1982.

9. L. Romanova, BI Mishankin, AN Kravtsov. Molekuláris klónozása és expresszálása a Hly-gének E. coli. Molekuláris genetika, mikrobiológia, virológia, 1984 2, 34.

10. T. Maniatis, E. Fritsch, J. Sambrook. Molekuláris klónozás. Mir 1984

11. Kulsky LA Ezüst víz. Kijevben. "Naukova Dumka" 1987

1. Eljárás elnyomására hemolitikus aktivitását patogén Escherichia coli törzsek, amely a használata az elektrolit oldat, azzal jellemezve, a betegnek egy elektrolitikus ezüst oldat koncentrációban 0,5-5,0 mg / l.

2. Az igénypont szerinti eljárás. 1., azzal jellemezve, hogy az elektrolit oldat ezüst egyidejűleg antibiotikummal.

3. Az eljárás azzal. Az 1. és 2., azzal jellemezve, hogy az elektrolit oldat ezüst beadott 2-9 napig.