Figyelembe és rögzítése - a gyakorlatban hisztológus
COLLECTION és rögzítő anyagok
(G.A.Merkulov persze patologogistologicheskoy technológia - .. 1967.
A legfontosabb megszerzésének feltételeit kiváló minőségű szövettani készítmények a következők:
1. mielőbbi átvételét anyag,
2. minimális szöveti trauma,
3. megfelelő rögzítés.
Vágási technológia ANYAG
Az optimális terület szövet darab 2 - 3 cm 2. Vastagság 5 - 7 mm.
Faragott darab ruhát közvetlenül a penge elmerül a zárat. Elfogadhatatlan szorította darab, mosás vízzel, és a felület tisztítása a test, különösen a nyálkahártya, szerszámok, ujjak, stb Miután merítjük a darabokat egy tartály bilincs csökkentjük ugyanarra a címke szám (titkosítást jegyekkel) írt ceruzával vagy tintával matt felület fotópapírra. Azokban az esetekben, ahol szükség van a címke minden darabot, azt, valamint a címke kötve egy géz táska. Az is lehetséges, drót szál darab: az első 2-3-szor az első darab varrott címkét, majd felszeleteljük, majd a következő címkét, és így tovább, egészen 10-15 darab.
A Samara OBSME is tartott jelölés darab szervek a karton az aláírásokat kitörölhetetlen tintával, vágás után darab karton jelölt helyezzük géz csomót levágott egy darabot.
Jelenlétében kóros területek a szöveti és szervi darabokat vágja a határ normál szövetben.
Darab üreges szervek vannak levágva, hogy a készítmény volt látható az összes réteget a fal. Szeletek fal az üreges test, amelyet előzőleg szétterítjük fényképészeti papír vagy karton.
Ahhoz, hogy tanulmányozza az edény falán át egy nagy területen a darabolást hosszában, roll be egy tekercs és varrt a közepén.
Hogy tanulmányozza a laza kötőszövet elő hártyás gyógyszerek: miután lemértük a kötőszöveti szalag húzza csipesz sovány tárgylemezre és rögzített.
Általános elvek rögzítése
Rögzítés stabilizálja a szöveti struktúrák és azok tömítést. A hatásmechanizmus alapul klipek koagulációs fehérjék és lipidek stabilizáció.
Rögzítés mindig vezet nagyobb vagy kisebb változások a szerkezete és mennyisége a szövet, melynek súlyossága attól függ, hogy a pH a rögzítő, a koncentrációt, a hőmérsékletet, a besugárzás időtartamát és egyéb tényezők. A hidrogénionok koncentrációját reteszt kell egyeznie, hogy a szövetekben azonban rögzítőt kell egy pH közel semleges. lock A hőmérséklet növelése gyorsítja a folyamatot, de ez még mindig egy nagy változás a szövetekben. Túl hosszú rögzítés vezet jelentős tömörítés az anyag, ami tovább bonyolítja a kezelése. Minden típusú vizsgálat kiválasztott legmegfelelőbb rögzítőt. A kevésbé alakváltozás megy szöveti struktúrák rögzítés során, a gyorsabb és mélyebb lesz a hatása a szövet, annál jobb tekinthető a fixáló folyadékot.
A teljes rögzítését az anyagban, amelyek bizonyos követelményeknek.
1. Vágás után egy darab szövetet azonnal elmerül a zárat.
2. A kötet a retesz meg kell haladnia az anyagmennyiség becsukott 10-20 alkalommal. mivel a szöveti folyadék jelentősen megváltoztathatják a koncentráció a rögzítő.
3. Abban az esetben, amely megváltoztatja a színét a zárat a merülés után bele anyagdarab, bilincs azonnal le kell cserélni.
4. Ne ismételt felhasználását bilincsek.
5. Minden reteszt figyelhető beállított idő rögzítés. Hosszan tartó expozíció az anyag csak akkor lehetséges, bizonyos bilincsek, mint például a 10% -os semleges formalin, Bouin folyadék.
Javításához jobban használható konténerek széles nyakú, így nincs probléma eltávolítja a rögzített anyag. Uniformity rögzítés laza néhány szövetek, mint például a tüdő, azt érjük el, azáltal, hogy azokat az alján a bankok, és a tetejükön - szóló, egy réteg gézt vagy pamut. Ez a technika lehetővé teszi, hogy elkerüljük hibakezelési fixálás darab tüdőszövet formájában való tapadás gumikesztyű lefedő jar a későbbi fejlődését egy darab autolízis. A nagy számú darabokat közbenső réteg pamut vagy gézzel.
A legtöbb anyag van rögzítve szobahőmérsékleten, de bizonyos típusú vizsgálatok (hisztokémia, elektronmikroszkópia stb) kell végezni fixálást 4 ° C-on Anyag sürgős biopsziák rögzített emelt hőmérsékleten tartósítószert. Amikor gyorsrögzítő a mélyben a tárgy gyorsan fejlődő autolítikus folyamatokat.
Egyszerűen rögzíti FLUID
A formalin. A fő általánosan használt inaktiváló formalin, ami 40% -os formaldehid-oldatot. Belőle elő semleges (pH-értékre pufferolt 7,0) 10-12% -os formalin. Ehhez egy korsó 40% -os formalin-öntjük kalcium- vagy magnézium-karbonát, vagy ezek keveréke sók - dolomit mértéke 100 g per 1 liter formalin. A 10% -os semleges formalin a 24 órás 1 rész 40% -os semleges formalin adtunk 9 rész csapvíz. Időtartam rögzítéséről 24-48 órán keresztül 20 ° C-on
Univerzális bilincs, alkalmas a legtöbb hisztológiai és hisztokémiai vizsgálatok, egy semleges formaiinnal Lilly.
A. 100 ml 40% -os formalin + 900 ml desztillált vízben.
B. 4 g nátrium-dihidrogén-ortofoszfát-monohidrát (nátrium-dihidrogén-foszfát).
B. 6,5 g dibázikus nátrium-(dinátrium-foszfát).
Ha az alján a tégelyek 40% -os formalin alakult fehér csapadék (paraformaldehid), ez lehet feloldani, felmelegítjük 70-80 ° C-on (fülkében!), És nem használhatók fel rögzítéshez.
Etil-alkohol (80%, 90%, 96% és 100%). Ezt használják tartósítószerként kimutatására glikogén, vas, amyloid, de oldódik lipidek. A hatásmechanizmus alapján a fehérjék kicsapása. ez kíséri kiszáradás lehetőség, ami jelentősen felgyorsítja a vezetékeket. A időtartama fixálása 2 óra és 1 nap. Növelése hossza a rögzítés, különösen a 100% -os alkohol, nem kívánatos, mivel az anyagot tömörítjük jelentősen, és ez bekövetkezik túlszárítástól. Az optimális hőmérséklet a rögzítéséhez az anyag egy alkohol +4 ° C-on, de végezhetjük szobahőmérsékleten. Ha az alkohol fixálás szövet kell vágni fagyasztó mikrotommal vagy kriosztát, a darabokat mossuk 1-2 órával a ellepje a alján a bankok, ahol a szövetet vízzel telített.
Aceton (hatása hasonló alkoholt). Az acetont használunk, hogy növelje a rögzítési sebesség. Alkalmazás 100% acetonból, és így acetont öntjük kereskedelmi kalcinált réz-szulfát (bluestone) vagy szilikagél. Az acetonnal rögzített szeletekre 3-4 mm vastag, 2 órán át 20 ° C-on vagy 30 perc - 1 óra termosztátban 60 ° C-on egy jól lezárt tartályban. Aceton lényegében bevonja a szövetet és meghosszabbítása Ez a rögzítés eltörne tárgyakat. A legtöbb acetont alkalmazunk feldolgozni az anyagot annak sürgős biopsziák öntjük paraffin.
Higany-klorid (a higany-diklorid). Sulemu tartósítószerként használják, hogy a kezdeti szövettani. Készítsünk egy telített oldat 10 g higany-klorid 100 ml desztillált vízzel vagy izotóniás nátrium-klorid-oldatot felforraljuk, lehűtjük és szűrjük. Időtartama rögzítő darab 3 mm vastag 6-12 órán át 20 ° C-on Amikor rögzítéséről higany-klorid előfordulhat a szövetekben a kristályos csapadékot eltávolítjuk úgy, hogy a jódozott szeleteket 70% -os alkohollal (50 ml 70% -os alkohol - 5-10 csepp 5% -os alkohol jódoldatot, míg narancssárga színű). Ahogy fehérítő jódozott alkoholt szakaszok hogy helyébe egy adag friss egészen a teljes elvesztése színű, majd a metszeteket mossuk 3-4 változása 70% -os alkohollal.
Az alkotó részek egyszerű bonyolult bilincsek. Számos variációja létezik a rögzítő keverékek. A következők a leggyakoribb.
Formol-alkohol Schaffer - 10% -os semleges formalin, ami elő 1 rész 40% -os neutrális formaiinban 2 - 3 rész 96% -os alkohol.
Időtartam rögzítéséről 24-48 óra. További mosóvizet nem szükséges, és az anyagot azonnal behelyezzük a 96% -os alkohol.
40% -os semleges formalin 100ml
Nátrium-klorid 8,5 g
Csapvíz 900 ml
A időtartama fixálása 48 órán át 20 ° C-on, majd mosás következik folyóvízzel 6-12 órán át.
Buena folyadék - a klasszikus zár kísérleti kutatás.
telített pikrinsav-oldatot adunk 75 ml
Semleges 40% -os formaiint 25 ml
Jégecet 5 ml
Időtartam rögzítés 1-24 órán át 20 ° C-on
A telített oldatot a pikrinsav előre elkészített alapú 3a kristályos pikrinsav 1 liter forró desztillált vízben. Fixálás után darabokat mossuk a feleslegben levő pikrinsav 70% -os etanolban, majd paraffinba ágyaztuk.
Kalcium-formalinos Baker használt rögzítéséhez lipidek.
A. 10 ml 40% -os formalin + 90 ml desztillált vízzel.
B. 1 g kalcium-klorid.
A és B oldatot összekeverünk.
Időtartam rögzítéséről 24-48 órán keresztül 20 ° C-on
Carnoy a folyadék - Univerzális tartó legtöbb szövettani és hisztokémiai vizsgálatok (kivéve kimutatására lipid).
Alkohol 100% 96%, vagy 60 ml-es
Kloroform 30 ml
Jégecet 10 ml
Időtartam rögzítés 2-4 órán át 4 ° C-on vagy 1-2 órán keresztül 20 ° C-on Az anyagot ezután helyezzük 100% -os alkohol. Ha az anyag nem közvetlenül kitéve a vezetékeket, átvihető a 96% -os alkohol és tartsa ott, amíg 3 nap.
KarnuaI használt rögzítő, amely 100 ml 75% -os alkohol és 25 ml jégecetet. rögzítéséről feltételek azonosak.
Hiányában etil-alkohol helyett Carnoy féle folyadék keveréke lehet az alábbi összetételű.
Izopropil-alkohol 60 ml
Propionsav 30 ml
Időtartam rögzítéséről 12-24 órán át 20 ° C-on; Izopropil-alkoholt használunk mosás és víztelenítés.
SZABÁLYOK rögzítőt
Gyakorlatilag az összes reteszek mérgező anyagok (aldehidek, aceton, alkohol), bizonyos toxikus (higany-klorid, ozmium-tetroxid, metanol), és ezért meg kell felelnie a biztonsági előírásoknak kezelésére a reagensek, amelyek használják a szövettani gyakorlatban.
A rögzítés és darabolás anyagot kell tenni elszívófülkében. Visszanyert anyag a rögzítőelemet tartalmazó formalin, előnyösen néhány perc alatt mossa folyó víz alatt, mint formalin gőzök irritálja a nyálkahártyákat, a szem és a légzőszervek.
Lehetséges leletek kapcsolódó rögzítés,
ÉS MEGOLDÁSOK
Amikor formalinos fixálás, különösen savas, előfordulhat szakaszok sötét barna pigment formájában granulátum vagy csomók (a reakció eredményeként a hemoglobinnal formaiinnal szövetek). Pigment helyezve eltávolítjuk a szeletek 15-20 percen át 1-5% -os ammónia-oldattal vagy 70% -os alkohollal. Vízzel való mosás után, a készítmény lehet festett. Jó pigment eltávolítjuk oldatot 1% -os kálium-hidroxid 80% -os etanolban (1,25), miután a 10 perces gyógyszer-expozíció mossuk folyó vízzel 5 percig.
Azokban az esetekben, jelentős szöveti tömítés eredmény túl hosszú rögzítési darabokat helyeztünk 1-2 órára 10% -os citromsav-oldattal (az anyag puhább lesz, és több alkalmas kutatás).
A képződött kristályos csapadékot fixálás után higany-kloridot eltávolítjuk, a darabok vagy szeletek jobban alkalmazásával jódozott 70% -os alkohollal.
Hisztológus mikrokészítményekhez a tanulmány figyelembe kell venni számos lehetséges leletek által okozott rögzítés az anyag:
1. A fejlesztési szöveti autolízis nagyszabású létesítmények vagy rossz rögzítés, az értékelési szakasz korlátozott (lehetetlen megbízhatóan kifejezni súlyossága szöveti ödéma, súlyossága Dystrophiás változásokat sejtek, reakció, mint a sejt elemek bomlása a háttérben autolízisét) .
2. A kompressziós szövetek saját rögzítő (lehet, hogy akár 40% -a az eredeti térfogat), és duzzanat a szövetek a rögzítés során előnyét, leletek, amikor mikromorfometrii (például növelni a leukociták a látómezeje a mikroszkóp a rögzítés során a lágy szövetek a tárgy 72 órán át vagy tovább, mint hogy ugyanaz a darab a lágy szövetek, a fix 24-48 óra)
3. Mechanikus sérülés idegszövet a megnyitón a koponya, az agy vizsgálat - zsugorodás, hyperchromia, fokozott neuronnukleuszok a deformáció,
4. állandó műalkotás a központi idegrendszerben - perivasculáris és sejt körüli rés tévesen diagnosztizálták sejtek körüli és a perivaszkuláris ödéma, és mások.
Ábra. 6, 7. betegségkitörések rothasztó emphysema veseszövet kifejezve autolízis. Hematoxilin-eozin. Növelése x100.
Post mortem szövettani jelei fagyasztás holttest szövetekben.
A post-mortem szövetben fagyasztás őket a mikroszkóp alatt látható tű vagy méhsejt kerek-ovális hibák (megtöri nyomokban megolvadt jég részecskék). Ebben az állapotban a szövetek beszélni hitelesen körülbelül vérüket töltés, a jelenléte és súlyossága ödéma, számos patológiás állapot nem lehetséges.
Ábra. 1, 2. postmortem jelei fagyasztás a szívizomban formájában sűrűn rendezett, lekerekített ovális méhsejt hibák, üregek, szemben mérsékelten expresszálódó autolítikus változásokat. Hematoxilin-eozin, x100 növelése és H250.