Immunhisztokémiai jellemzése tumorsejtek

Szakértői vélemény - MD professzor kórbonctani Orvostudományi Kar Orvosi Egyetem MV Samoilov

A kézikönyv keretében innovatív oktatási program, a Magyar Népi Barátság Egyetemen, az irányt „exportorientált komplex innovációs képzési programok prioritási irányokat a tudomány és a technológia”

GYAKORLATI KÉRDÉSEI oncomorphology

Tárgy száma 10. Az immunhisztokémiai jellemzése tumorsejtek. Tumor epiteliális

Jelenleg, immunhisztokémiai módszerrel kutatás széles körben használják a kimutatására ismeretlen primer tumor jelenlétében metasztázis. 10 és 15% a rák metasztázisok jellemzi különböző szervekben, üregek és a nyirokcsomók.

Az esetek gyakorisága, amikor a betegség kíséri a metasztázisok kialakulását, és lokalizációja primer tumorok idején morfológiai vizsgálat nem ismert, az 3-15% -a az összes rák. Így a lokalizáció a elsődleges kamrát határozza meg egy átlagos élettartama 30-40% -ánál, a boncolás során - 60-70%.

Immunhisztokémiai vizsgálat függően morfológiai típusú daganata segít tisztázni hisztogenezisében a tumor és / vagy megjegyzést valószínű a primér tumor. A legtöbb ilyen daganatok adenokarcinóma az emlő, vastagbél, tüdő, petefészek, hasnyálmirigy, prosztata és a gyomor.

Abban az esetben, metasztatikus adenokarcinóma feladat immunhisztokémiai tanulmány célja, hogy azonosítsa a valószínű forrása áttét.

Ezekre a célokra, a jelenleg használt számos markerek, beleértve a citokeratin 7 és 20, a pajzsmirigy transzkripciós faktor (TTF-1), CA125, CDX2, ösztrogén receptorok, GCDFP-15, lizozim, mezotelin, prosztata-specifikus antigén.

Citokeratin 7 (CK7) kifejezés egy család intermedier filamentum fehérjével, molekulatömege 54 kDa érzékel különféle mirigyes epithelium. Antitest klón OV-TL (Dako) festettük citoplazmájában különféle típusú normál és daganatos mirigyhám sejtek, beleértve a ductalis epithelium. CK7 érzékel hengeres sejtekben és mirigyhám a tüdő, méhnyakrák, emlő, epeutak és összegyűjtjük csatornák a vesék. CK7 foltok a átmeneti hám a húgyhólyag epitélium a petefészek és a tüdő. Néha talál pozitív sejtek vascularis endothelium. Az viszont, CK7 nem expresszálódik a hámsejtekben a gasztrointesztinális traktus, a prosztata. Gyakorlatilag CK7 nem lehetett kimutatni a hepatocitákban, epiteliális proximális és disztális tekervényes tubulusok a vesék, myoepithelialis sejtek, többrétegű epitélium a bőr, a nyelv, a nyelőcső és ectocervix. A monoklonális antitestek OV-TL azonosítani bizonyos típusú adenokarcinómák és lehet használni közötti differenciáldiagnosztikai CK7-pozitív szövetek (mint például a petefészekrák és perehodnokletochny rák) és CK7-negatív szövetek (mint például adenokarcinóma a gyomor-bél traktus és a prosztatarák).

Citokeratin 20 (CK20) a képviselője I. típusú keratin, amely közvetlenül kifejezve a hám a gyomor és a vékonybél, urothelium és Merkel sejtek a bőr. Antitest (klón Ks 20,8, Dako) reagálnak a megfelelő fehérje molekulatömege 46 kDa. CK 20 - a fő fehérje érett enterociták és kehelysejtet; ez specifikusan expresszálódik hámsejtekben a gyomornyálkahártya és a vékonybélben. Azt is meg lehet azonosítani mell adenokarcinómái, vastagbél, gyomor, hasnyálmirigy, az epe hajszálerek mucinosus petefészek tumorok, perehodnokletochnom hólyagrák és a rák a Merkel sejtes. Másfelől, a pikkelyes rákok, adenokarcinómák, a mell, a tüdő, a méhnyálkahártya, nem mucinosus petefészek-tumorok, és a kis-sejtes tüdőkarcinóma CK 20 nem expresszálódik.

TTF-1 - nukleáris transzkripciós faktor, ami a homeodomén fehérje család NKX2 (molekulatömeg 40 kDa); kifejezett embrionális és felnőtt szövetekben a tüdő és a pajzsmirigy. A sejtmagok a legtöbb sejt más szervek - máj, gyomor, hasnyálmirigy, vékonybél és a vastagbél, a vese, az emlő, bőr, a herék, az agyalapi mirigy, a prosztata és a mellékvese aktív faktort nem tartalmazott. TTF-1 volt kimutatható a primer tüdő adenocarcinoma, és nem expresszálódik mell adenokarcinómái, vastagbél és mellrák. Antitestek a TTF-1 értékes markere a differenciál diagnosztikájában tüdőadenocarcinoma metasztázisok mellrák, és mesothelioma. A azonosítása tüdő adenocarcinoma a TTF-1 elszíneződés sokkal specifikusabb, mint használ antisurfaktantnyh antitestek.

Lizozim hidrolízisét katalizálja egyes mukopoliszacharidok a sejtmembrán baktériumok. Azonosítására használt tumorok histiocyták és leukémiás mieloid sejtek sorozat. Ez kimutatható volt lépsejtek, tüdő, vese, vér leukociták, plazma sejtek, nyál, tej és könnyfolyadékkal.

Mezotelin - celluláris glikoprotein (molekulatömeg 40 kDa), található a felületén mesothel sejtek és kapcsolatban áll a sejt adhéziós mechanizmusokkal. Azt is felfedte mezoteliómás, hám eredetű petefészek rák és bizonyos laphám rák. Klón 5B2 (Novocastra) folt epitheloid mesothelioma és adenocarcinoma a tüdő, petefészek, hashártya rák, endometrium, hasnyálmirigy, gyomor és a vastagbél. Az antitestek nem reagálnak a veseszövet, máj-, placenta, a bőr és a pajzsmirigy. Mezotelina sok közös mesothel sejtekben, amelyek képződnek rosszindulatú mesothelioma, és a petefészek cystadenocarcinoma. Ezek az antitestek, valamint az anti-calretinin lehet használni azonosítására mesotheliomas.

CDX2 - prokarióta rekombináns fehérje megfelelő aminosav-N-terminális része a molekula CDX2 személy. Ez egy specifikus transzkripciós faktor a vékonybél sejteket. CDX2 gén kódol bél-specifikus transzkripciós faktor, a fehérje expresszálódik a fejlesztés korai szakaszában a vékonybél és lehet, hogy a különbség a szabályozásában proliferációját és differenciálódását hámsejtek a vékonybél. Ez fontos szerepet játszik a megindítását sejtek differenciálódása érett enterocitáinak. Klón AMT28 (Novocastra) reakcióba lép a 40 kDa fehérje, található a sejtmagokban. Ez fejeződik ki a sejtmagok a hámsejtek a bél a duodenum a végbélig. CDX2 fehérje expresszálódik az elsődleges és áttétes tumorok a vastagbél, valamint által feltárt intesztinális metaplázia és a gyomor-bélrendszerben típusú gyomorrák, viszont ez nem található meg normális epiteliális sejtjeiben a gyomorban. Ez a fehérje található csak magjaiban hengerhám sejtek és rákos kolorektális adenokarcinóma, így lehet használni, hogy azonosítani áttétek a vastagbél rák.

CA125 - petefészekrák fehérje-antigénnel. Monoklonális antitest (klón Ov185: 1, Novocastra) felismerik egy mucin-szerű glikoprotein molekulatömege körülbelül 200 kDa. Antitestek festettük különféle tumorok, például vastagbél-adenokarcinóma, mell-adenokarcinóma, a méh daganatai, a broncho-alveoláris rákok, méhnyálkahártya- és petefészekrák serosus adenocarcinoma.

ER - ösztrogén receptorokhoz. Clone 6F11 (Novocastra) kölcsönhatásba lép ösztrogénreceptor alfa. Az antitesteket festettük sejtmagok az ösztrogén receptorok a méh epiteliális és simaizom sejtek, és emlőmirigy epiteliális magok. Azonosítása receptorok szteroid hormonok széles körben használják a hormon-dependens tumorok. A ösztrogénreceptor jelenléte egy markere mellrák, és prognózisa lehet indikatív a betegség, valamint a hatékonyságát endokrin terápia.

Prosztata-specifikus antigén (PSA) - egy glikoprotein. Clone ER-PR8 (Dako) egy kapott fehérje molekulatömege 35 kDa. PSA immunhisztokémia és biokémiailag különböznek a többi széles körben alkalmazott prosztatarák marker - a prosztata savas foszfatáz. Nem található a citoplazmában acinus és duktális epithelium a normál szövet detektáljuk a jóindulatú prosztata hiperplázia és adenocarcinoma. Ezek az ellenanyagok kimutatására használt áttétes prosztatarák, mint a PSA áll prosztata tumorsejtek és a plazmában meghatároztuk a betegek prosztatarák.

GCDFP-15 - a fehérje. amely akkor diffúz cisztás tőgygyulladás, amelyet az jellemez, makro- és mikrociszta duktális és lobuláris hyperplasia, és mások. emlő Pathology. Ciszták kialakítva apocrine szekréciójának hámsejtek. cisztafolyadékban tartalmaz glikoproteinek, beleértve egy egyedi 15 kDa monomer. A normális szövetekben a szerű fehérje található a hám a könnycsatorna, szublingvális és kis nyálmirigyekben, a sejtek a savós hártyák, tracheális és hörgő mirigyek.

GCDFP-15 és a PSA egyidejűleg expresszálódik emlődaganatok pozitív androgén receptorok. Ez a marker lehet használni azonosítására mell-adenokarcinóma, ductalis rák a nyálmirigyek és apokrin hám.

Rész markerek, mint a PSA a prosztatarák, TTF-1 tüdőrák, monospecifikus munkát. Egy másik része ennek a panel markerek jellemző számos daganat, így ösztrogén receptorok mutathatók ki mellrák vagy petefészekrák, CDX2 - a daganatok a gyomor-bél traktus. Rész markerek csak jellemzik a forrás metasztázis komplex: ösztrogén receptorokat, és mezotelin jellemzésére CA125 petefészek tumor.

Amikor laphámrákáttét az immunhisztokémiai vizsgálat nem praktikus, mert a lehetőségek a módszer nem teszi lehetővé, hogy meghatározza a valószínű forrása áttét. Ez vonatkozik az áttét a rosszul differenciált neuroendokrin rák. Azonban, jól differenciált neuroendokrin metasztázisok rák (szinonima - atípusos carcinoid) együttes expressziója CK7 és TTF1 utalhat lokalizációja a primer tumor a tüdőben, és koexpresszióján CK20 és CDX2 - az emésztőrendszerben.

A áttétes betegségben nem egyértelmű morfológiai jelei mirigyes (adenogennoy), neuroendokrin és pikkelysejtes differenciálódás, a fő feladata a további kutatási módszerek tisztázása hisztogenezisében a tumor (pontosabban, hogy létrehozza az irányt differenciálódásának). Erre a célra a következő az ellenanyag-panelt alkalmazunk: p63, CK5, CK14 vagy CK5 / CK6, CK18, SD56 (N-CAM).

A fehérjére vonatkozó antitestek P63 (klón 4A4, Dako). P63 fehérje p53 családjába tartozik a tumor szuppresszor gének, amelyek magukban foglalják a fehérje P73. Ezek a fehérjék szabályozzák a celluláris folyamatok a transzkripció és elindítása folyamatok apoptózis válasz a DNS-károsodás és hypoxia fejlődését. P63 fejezi ki a sejtmagok a bazális sejtek a hám különféle. P63 fehérje detektálása a szaporodó sejtek a nyaki epithelium, urothelium és a prosztata. Azt is kifejeződik a legtöbb rosszul differenciált pikkelyes rák. P63 antitestek, hogy segítsen megkülönböztetni jóindulatú és rosszindulatú daganatok a prosztata.

A fehérjére vonatkozó antitestek CD56 (MOS-1 klón, Dako). CD56 egy fehérje antigén természetes ölősejtek. Reakciók CD4 + és CD8 + T-sejtek a perifériás vérben. CD56 mutatható neuroblasztóma és kissejtes tüdőrák, valamint néhány egyéb tumorok.

Citokeratin CK5 / CK6 (klón D6 / 16 B4, Dako). Citokeratin egy család intermedier filamentumok, és megállapította, gyakorlatilag az összes sejtben. Típusai citokeratin CK5 / CK6 kimutatható mesothelial sejtekben, és nem talált adenokarcinómákban. CK5 / CK6 alkalmazhatók markerként a mezotelióma és a tüdő pikkelysejtes rák, Bowen-kór (karcinóma faj, amely megtámadja bőr pikkelyes sejt az epidermisz, de nem nyúlik annak bazális rétegek). Ezek nem találhatók adenocarcinoma a tüdő, de festettük mesothelioma és a bazális sejtek a prosztata. Ezek az antitestek nem reagálnak a szövetek mezodermális eredetű, mint például az izom és a kötőszövet. Citokeratin CK5 / CK6 kifejezett rosszul differenciált adenocarcinoma és azonosított epithelioid mesothelioma.

Citokeratin CK14 (LL002 klón BioGenex), molekulatömege 50 kD - savas citokeratin első típus, amelyen keresztül lehetőség van megkülönböztetni rétegződött pikkelyes hámban egyszerű hám. Cytokeratin CK14 egyenletesen citoplazmájában kifejezett minden sejt a rétegződött pikkelyes elszarusodó hám. A monoklonális antitestek a citokeratin CK14 segítséget megkülönböztetni azon sejtek az emlőmirigyben fejlesztése során adenokarcinóma.

Citokeratin CK18 (DC10 klón, Dako) - egy fehérje, amelynek molekulatömege 45 kDa. Az antitestek reagálnak a legegyszerűbb epithelium, beleértve a hám a csatornák és a acinusokban mirigyek. Ez a fehérje expresszálódik az epitéliumban a pajzsmirigy, mell, gyomor-bél traktus és a légutakat. Alkalmazott ellenanyagok kimutatására tüdőrákokban, és ők megfestjük citoplazmájában tumorsejtek epiteliális és nem epithelialis festett tumorsejtek (glióma, melanóma, oszteoszarkóma).

A differenciál diagnosztikájában high-grade tumorok következő algoritmust használjuk:

1. CK18 (+) - adenokarcinóma;
2. SK5 / 14 (+) és a p63 (+) - pikkelyes sejt karcinóma;
3. SK5 / CK14 (+), CK18 (+) a p63 (+) - perehodnokletochny rák, pikkelyes sejt karcinóma, thymoma;
4. CK18 (+), CD56 (+) - neuroendokrin rák.
5. A azonosítására expressziós SK5 / 14, CK18 és p63 perehodnokletochny differenciált pikkelyes rák a bizonyos esetekben esetleg vizsgálatával koexpressziója SK7 és SK20, amely megfigyelhető a körülbelül 60% a rák metasztázis perehodnokletochnogo.