Kórisme leukémia szarvasmarha - Reed

Marha leukémia - krónikus fertőző betegség vírus által okozott a szarvasmarha leukémia (VLKRS). Leukémia beteg szarvasmarha minden korosztály számára. Klinikailag a betegség gyakrabban fordul elő idősebb állatok 4 év.

A betegség kezdetben tünetmentes, majd kifejlesztett egy perzisztens lymphocytosis illetve a kialakulását a tumor-szerű kinövések a hematopoietikus és más szövetekben és szervekben.

A kórokozója szarvasmarha leukémia onkogén RNS-vírus a Retroviridae család.

kórokozó forrás - fertőzött állatok VLKRS.

transzfer tényezők a vér, a tej és más titkok és ürülék tartalmazó limfoid sejtek fertőzött VLKRS.

Fertőzés is előfordulhat, ha közös tartalma az egészséges és fertőzött állatok VLKRS.

Az alapja a diagnózis a szarvasmarha leukémia a szerológiai kutatás módszere - diffúzió kicsapási reakció (RDP), egyébként ismert immundiffúziós reakciót agargél (RID).

Között a pozitív reagáltatásával RID állatok (fertőzött VLKRS) alkalmazásával hematológiai módszerrel, szenvedő betegek azonosítására leukémia.

A reakció a immundiffúziós (RID). A módszer alapja az a szérumban az állati-specifikus precipitáló antitestek, hogy az antigéneket a vírus szarvasmarha leukémia. Specifikus antitestek jelennek meg a vérben 2-8 héttel a fertőzés után és állati VLKRS a szervezetben tárolt életen át tart.

Vérmintákat vettünk kutatási legkorábban 30 nappal a beadás után a vakcinák és állati allergének vemhes állatok - legalább 30 nappal az ellés előtt vagy után 30 nappal.

Megszerzése szérumot. Sera vizsgálatához állították elő a kísérleti állat vér mennyisége 3,2 ml, és a laboratóriumba küldeni a kísérő dokumentum, amely jelzi a cím gazdaság számát (becenév), az életkor, nem, fajta az állat.

Blood (szérum) hozott bakteriológiai kémcsövekben, inkubáljuk 1-2 órán át meleg helyen (nem magasabb, mint 40 ° C). A jobb a fázisok elkülönülését körülveszik a vérrög in vitro proflombirovannoy után minden huzalmintát. A csöveket inkubáltuk 20-24 órán át 4-10 ° C-on Ha képtelen gyorsan elkészített tanulmány szérumot tárolt fagyasztott állapotban.

A RIM készítmény felhasználásra kit szerológiai diagnózis céljára a szarvasmarha leukémia, amely tartalmaz: száraz-specifikus antigén leukémia vírus szarvasmarha antigén hígító fajlagos kicsapó szérum (PCA), hogy a vírus a leukémia sókeverék agar (PAS) és hígítószert PAS kontroll szérumokkal: negatív, pozitív, a pozitív és a gyengén pozitív antitest p-24 antigén VLKRS.

Felszerelés és reagensek:

• Petri-csészébe 100 mm átmérőjű;

• Szabványos bélyeg bélyeg, hogy megakadályozza lyukak az agar;

• adagolók, eldobható végekkel;

• nátrium-klorid (reagens tisztaságú);

Nyilatkozat a RID. Előállítása A reakció komponenseket a végzett munka összhangban „utasítás használatával a készlet szerológiai diagnózis céljára a szarvasmarha leukémia.” Az antigént feloldjuk 5 cm3 hígítószerben. Az oldott antigén-on tároltuk 4 ° C-on legfeljebb két hétig.

Vékonyabb PAS agar és a só elegyet átvisszük egy lombikba, és öntjük desztillált vizet, hogy a térfogata 200 cm3, majd a lombikot vízfürdőben tartjuk mindaddig, amíg teljes megolvadása az agar gyöngyök. Olvadt agargél, amelynek hőmérséklete 50-70 ° C, öntött réteg 2-3 mm (12-15 ml) zsírtalanított Petri-csészékben, és hagyjuk őket nyitva szobahőmérsékleten 1 órán át. A megszilárdulás után az agar speciális die-lyukasztó, hogy a lyukakat gél, megakadályozza a repedések köztük és különítmények aljáról az agar lemezeken. Az egyes csésze, hogy 5 számok, amelyek mindegyike áll, 7 lyukak: egy a központban, a többi a periférián.

Antigén, kontroll és teszt szérumok hozzáadtuk a mérőhelyekhez az egyes szám adagoló, eldobható végekkel.

Antigén (A) vezetjük be a központi nyílás, két, átmérőben ellentétes megtöltött fészkek kontroll szérum (CS). 4. ábra maradó kerületi kutak (1.2, 3.4) vannak töltve, a tesztelendő szérumokat. Az üregeket kitöltve, hogy a felső, elkerülve transzfúziós folyadék szélére. A feltöltés után minden lyukba Petri csészéket lezártuk, és tegye egy kemencében T = 20 48 órán át.

Könyvelési és értékelése választ eredményez. A reakciót figyelembe kell venni nem korábban, mint 48 órával és nem később, mint 96 óra.

Csészék böngészi a sötét háttér, irányítja a fókuszált sugár a megvilágító alján a csésze szögben 30-45 °. A reakciót értékeltük csak akkor, ha az agar-gél között van kialakítva a furat tiszta precipitációs vonalat. Ha ez hiányzik, vagy gyengén fejlett, a reakciót meg kell ismételni.

Egy specifikus precipitációs vonalat, által alkotott kicsapva a kontrollszérum és az antigén egyértelműnek kell lennie, hogy a forma egy egyenes vonal, egyenlő távolságra kutak antigénnel és a vizsgálati szérum.

Tekinthető nemspecifikus precipitációs vonalat között van kialakítva kutak a vizsgálati szérummal és az antigént, de nem egyesíti a kontroll vonal a csapadék, és metszi, vagy hozzákapcsolódik, amely egy sarokban.

Attól függően, hogy a specifikus antitestek jelenléte elleni antigének teszt szérumban VLKRS reakciót értékelik pozitív vagy negatív.

Tekintsük pozitív reakció, ha lyukak közötti antigén és a vizsgálati szérum precipitációs sáv van kialakítva, amely kapcsolódik a kontrollszérummal precipitációs sáv, amely a folytonos vonal, azaz azonos vele.

• Ha a precipitációs vonalat lyukak közötti a vizsgálati szérummal és az antigén hiányzik, de a kontroll vonal lecsapató tejsavó formák közelében a lyukakat a vizsgált vonal hajlítsa felé irányul kutak az antigén - gyengén pozitív szérum;

• Ha a kontroll vonal jelentősen lerövidül a lyukakat a vizsgálati szérummal, és egy diffúz hajlítsa a lyukat a antigénnel vagy képez precipitációs vonalat található, nagyon közel van a jól az antigénnel - élesen pozitív szérum.

A pozitívan reagáló szérum képezhet a második sorban a csapadék, amely közelebb van a lyuk a tesztelni kívánt szérummal. Ez a vonal jelzi a jelenlétét precipitáló antitestek szérumban egy második antigénnel szemben (p24) VLKRS.

A formáció egy vastag, rövid, a könyökök nélküli kontroll vonal csapadék nem éri a lyukakat a tesztelni kívánt szérummal rastitrovku elvégzéséhez szükséges ezt a vizsgálatot a szérum sóoldattal, hogy olyan eredményt kapjunk, amely lehet értékelni, mint negatív, pozitív vagy nem-specifikus. Ez megköveteli sóoldat térfogatban 100-500 ul öntjük csövek vagy lyukakba szabványos műanyag lapok beállítására szerológiai vizsgálatok (csövek száma vagy kutak számának felel meg szükséges hígítás). Az első teszt csőhöz vagy lyukhoz fiziológiás sóoldattal, hogy az azonos mennyiségű szérum, összekeverjük, majd ugyanazon a pipettázási azonos térfogatú, hogy a következő jól, vagy fiola, majd miután a keverést - a következő, és így tovább

Ennek eredményeként, az első kémcsőbe vagy alatt is vizsgálandó szérum hígított 2-szer, a második - 4-szer, a harmadik - 8-szor, stb

A reakciót akkor tekintettük negatív, ha a kontroll vonal kiterjed az üregekhez a tesztelni kívánt szérummal hajlítás nélkül.

Azokban az esetekben, amikor a csapadék vonalat rossz, vagy van egy látható opaleszcens zóna körül a kutak, a reakciót kell átrendeződik.

A sebességváltó vezérlő precipitációs vonal irányába a kutak az antigénnel vagy a kontroll szérum jelzi zavara antigén és antitest aránya a vizsgálati rendszerben. Ebben az esetben egy másik sor diagnosztikai kit kell használni.

Állati vér szérumokat teszteltük pozitív RID felismerik leukémia vírussal fertőzött, és meg kell vizsgálni a hematológiai módszerrel.

Reakcióvázlat stádium és értékelés immundiffúziós a agargél (RID)

1- hátrányosan reagáló szérum, szérumot pozitívan reagál 2-, 3- reagál gyengén pozitív szérum 4- pozitív szérum reakcióba lép a második sorban a csapadék, 5- élesen reagál kedvezően a szérum 6- pozitívan reagál nemspecifikus szérum-precipitációs vonalat, a szérum negatívan reagál 7- egy nem-specifikus precipitációs vonalat, 8- negatívan reagálhat szérum opálos zóna egy antigént oncornavirus szarvasmarhában, KS kontroll szérum ellen glikoprotein antigén nkornavirusa szarvasmarha.