radioimmunoassay

Kialakulásának és fejlődésének a P. m. Munkával kapcsolatos Yalow és Berson (R. S. Yalow, S. A. Berson, i960), javasolt eljárás meghatározására az endogén inzulin a vérplazmában.

. ÖSSZEFOGLALÁS R. m meghatározására használják antigént (lásd.) A vonatkozó immunszérumokat, és adagoljuk az antigén - antitest-antigén jelölt radioaktív izotóppal, pl, jód (125l), ami a kötődést (jelöletlen) és jelzett antigén egy korlátozott mennyiségű antitest. Mivel a. Jelölt antigént adunk egy adott dózis, lehetséges meghatározni, hogy melyik részét érintkeztetjük az antitestek és mely része marad a nem kötődött a versenyben jelöletlen antigént kimutatható. Bizonyos koncentrációkban mérjük a jelölt antigén az antitesthez kötődik fordítottan arányos a mennyiségű antigén meghatározva. Vázlatosan ez a folyamat leírható a következő:

Miután a kölcsönhatása antigének antitestekkel képződött antigén-antitest komplexek (lásd. Az antigén-antitest reakció) elválasztjuk a szabad jelzett antigént. Branch antigén-antitest komplex termelt különböző módokon: elektroforézissel (. Cm), gélszűréssel (cm.), Frakcionális etanolos kicsapást az immunkomplex, ammónium-szulfát, stb, valamint révén aggregációját immunkomplexek antiglobulin szérumot vagy szorpciós őket immobilizált. (csatolt a felszínre a szilárd fázis) antitesteket. Ezen túlmenően, a szorpciós a rendelkezésre álló szabad jelölt antigén alkalmazásával hozzáadott anyagokat, például, a talkum, a cellulóz, kvarc, aktív szén és mások. Szétválasztása a kötetlen jelzett antigén az antigén-antitest komplex, összegének meghatározása jelzett antigén kötődik a bonyolult, de az impulzusok számát (via szcintillációs számlálóval). Csökkentése az impulzusok száma egységnyi idő alatt in összehasonlítva a megfelelő kontroll jelenlétét jelzi a homológ jelzett antigén kötődött az anti-szérumot, ahol a jelölt antigén nem lépett a reakciót, és nem határozza meg az antigén-antitest komplex.

Elleni immunszérummal a meghatározott antigén és a jelölt antigén előzőleg titrált és használni P. m. Az optimális hígításnál, a rum kötődések előfordulásának 50% a bevezetett címke. Az adatok kiértékelését használjuk (grafikon) függően a kötésért a jelzett antigén a szérumban optimális hígítású koncentrációban jelölt (standard) antigént.

Széles körben használják a P. m. Antitest szérumot az antigénnel szemben, immobilizált (adszorpció Rowan) a műanyag felületek vagy kémiailag kötött, hogy a polimer felületére. 1966 g. Kett (K. J. Catt) egy csoportja a kutatók, valamint a széles és Porat (L. Széles, J. P. Porath) használt P. m. Ellenanyag immobilizálására a gyantán. Kimutattuk, hogy immobilizálására antitestek cellulóz vel és Sephadex-ciánnal, valamint a különböző műanyagok nélkül egy aktivátor kezelés. A reakció végrehajtása során a polisztirol csövekben immobilizált antitestekkel a belső felületen meghatározott azáltal, hogy a antigénnel. Az inkubálás után, a nem kötött antigén mosással eltávolítjuk, és a jelzett antigén bevezetjük, amelyet azután eltávolítunk, ugyanúgy meghatározásával további arányban megkötött radioaktív izotóp.

Van számos módszer F. M. kettős antitest rendszer, ha az antitest-antigén komplexet feldolgozása antiglobulin szérumot kicsapó (második antitest), majd elválasztjuk a csapadékot centrifugálással. Hozzáadása együtt antiglobulin szérumot a normális vér szérum ugyanazon állat. a to- első előállított antitest elősegíti kicsapódását komplexek.

Meghatározása az antigén segítségével jelzett antitest neveztük IRMA módszerrel. Ebben az esetben, az antigén előzetesen rögzítve van a szilárd fázishoz, például polisztirol kémcsövekben. Megfogalmazásakor reakcióban meghatározott antigén komplexet képez a jelölt antitestet oldatban marad, és a nem reagált antitest reagál egy antigénnel kapcsolódnak a szilárd fázishoz. A kiviteli alakban immunoradiometrikus módszer - kettős kapcsolási módszer - meghatározott antigént komplexált antitest immobilizálunk egy szilárd fázisú. Ezután, eltávolítása után szabad antigén mosásával A szilárd fázisú felület adunk jelzett ellenanyagok biztosítására kimutatására komplex. A radioaktivitást az antitest - antigén - antitest - 125 I radioaktivitást összehasonlítjuk a kontrollminták, tartalmazó minták ismert, és nem tartalmaznak antigént.

Nagy érzékenységű P. m. (Pikogramm a analit) megengedett pontosabban koncentrációjának meghatározására számos biológiailag aktív vegyület. A hátrányok P. m. Az esetleges csökkent specifitást a szennyezések miatt a mintában meghatározzuk, például bizonyos gyógyszerek, és a jelenlétét a szérumban a kereszt-reaktív antitestek. Továbbá antigének és antitestek jelzett gamma-sugárzó izotópok, rövid eltarthatósági ideje; amikor a különleges biztonsági intézkedéseket kell eleget tegyen. Ebben a tekintetben, van kevésbé veszélyes módszer elvileg hasonló P. m. A beállított alkalmazni antigének vagy ellenanyagok jelzett egy enzimmel (lásd. Enzim-immunológiai módszerrel). A széles körű bevezetését P. m. Hátráltatja megszerzésének nehézsége szabvány jelzett szérummal és antigének, hogy tartsa be a szabályokat a felhasznált radioaktív készítmények drága berendezések (gamma és béta-számlálók, mélyhűtőtér-, számítógépek stb) és reagensek nagy a követelmény a tisztaság szabványok, valamint a rendkívül specifikus szérum.

Irodalom: immunológiai kutatási módszerek a klinikán és a kísérlet, ed. A. Ya. Lysenko, M. 1978; Immunological Methods, szerk. X. Frimelya, transz. vele. M. 1979 Ch ard T. radioimmunológiai módszerek sávban. az angol. M. 1981 refs.; Yalow R. S. a. Berson S. A. Immunológiai vizsgálati endogén plazma inzulin emberben, J. Clin. Invest. v. 39, p. 1157, 1960.