Törzs Staphylococcus hominis KLP-1 - előállítására a kis molekulatömegű, peptid vegyületek, amelyek gátolják
Törzs Staphylococcus hominis KLP-1 klinikai mintákból izolált szkrínelés során a koaguláz-negatív staphylococcus törzsek termelésére képes kis molekulatömegű antimikrobiális peptidek. Törzset letétbe helyezték a gyűjtemény GNIISKMPB őket. Tarasevich számozott 284. Amikor folyékony tápközegben tenyésztjük a törzset az jellemzi, nagyobb hozammal szolgáltatja az alacsony molekulatömegű, peptid antibakteriális vegyületek, amelyek gátolják a növekedést a Gram-pozitív baktériumok ellen. Az antibakteriális hatás nyilvánul baktériumok ellen az alábbi nemzetségek: Arthrobacter, Bacillus, az Enterococcus, Micrococcus, Mycobacterium, Rhodococcus, Staphylococcus, Streptococcus. Hozam antibakteriális peptidek alacsony molekulatömegű van 1024000 ETE 1 liter közegben. 1 il. 1. táblázat.
Rajzok a Magyar Szabadalmi 2428470
A találmány tárgya a biotechnológia területén, az orvosi mikrobiológia és mikrobiológiai ipar, és kapcsolódik a termelő törzs Staphylococcus hominis KLP-1, termelő alacsony molekulatömegű, peptid vegyületek, amelyek gátolják a fejlődését Gram-pozitív mikroorganizmusok.
A tenyészetet folyékony Staphylococcus hominis KLP-1 antibakteriális aktivitás nem mutatható, a túlnyomó Staphylococcus epidermidis 33 fejlesztés és más Gram-pozitív baktériumok ellen. Azt találtuk, hogy a baktériumellenes hatás jelenléte miatt a két alacsony molekulatömegű peptidek, amelyek nem igényelnek szinergetikusan kiegészíti egymást az aktivitáshoz. Azonban, a baktériumellenes hatás a kombinált hatása a peptidek jelentősen növeli.
Izolálása antibakteriális vegyületek egy jól ismert jellemzője bizonyos típusú Staphylococcus spp.
Az irodalomban leírt törzsek a Staphylococcus, amely érdekes lehet a biotechnológiai előállítására antimikrobiális peptidek kereskedelmi célokra.
Ismert S. epidermidis törzset 5, szekretáló kis molekulájú peptid vegyület Pep 5, a spektrumú antibakteriális aktivitással rendelkeznek, amely korlátozza tagjai más faja Staphylococcus és néhány faja Micrococcus (Sahl HG és Brandis H. Hatásmechanizmus a staphylococcin-szerű peptid Pep5 és tenyésztési körülmények befolyásoló annak aktivitását. Zentralbl. Bacteriol. Mikrobiol. Hyg. 1982 V.252, № 2 P.166-175).
Így, ezek az ismert törzsek viszonylag szűk spektrumú mikrobaellenes hatást.
A megoldandó probléma a jelen találmány szerint az, hogy egy új törzs mikroorganizmusok-gyártók a magasan aktív peptid vegyületek kis molekulatömegű széles spektrumú antibakteriális hatást.
A műszaki hatás nyerhető a gyakorlatban a találmány szerinti fokozott hozamát a cím szerinti vegyületet igen aktív, széles-spektrumú antibakteriális aktivitást, amikor tenyésztünk előállítására gazdag tápközeg.
A találmány összefoglalása - törzs Staphylococcus hominis KLP-1 szekretáló tenyésztve folyékony tápközegben fokozott mennyiségű alacsony molekulatömegű, peptid antibakteriális vegyületek, amelyek gátolják a növekedést a Gram-pozitív mikroorganizmusok különböző nemzetségek, és a családok.
Törzset letétbe helyezték a gyűjtemény az állam Kutató Intézet Szabványügyi és Ellenőrzési Orvosi Biológiai készítmények. L.A.Tarasevicha szám alatt 284, mint a kis molekulatömegű antimikrobiális peptidek előállítására széles hatásspektrum, eltér ismert törzsek lényegesen magasabb a termelés ezen vegyületek a szakaszos tenyésztés.
Növekedési agar táptalajon.
Amikor beoltjuk ferde löket nőnek formájában sima szélű kör sima tejszerű fehér telepeket, amelyek mérete aerob körülmények között 37 ° C-on 24 óra után 1,2-1,5 mm, 48 óra után 1,7-1, 9 mm-es és 72 mm-es 2,0-2,2 óra. A telepeket könnyen eltávolítható a felületről az agar mikrobiológiai hurok.
Folyékony tápközegben tenyésztve.
Amikor beoltása folyékony táptalajt keverés közben feltételek tapasztalt gyors növekedés formájában homogén szuszpenzió, amely állás baktériumsejteket egyenletesen rendezi az az edény alján, és mozgassa könnyen újra rázással. Az optikai sűrűséget egy homogén folyadék szaporított egyéjszakás tenyészetét 250 ml térfogatú lombikokba 50 ml tápközegben 37 ° C-on termosztált rázógépen Certomat ( «Sartorius», Németország) 150 fordulat / perc eléri 2,7-3,2 (detektor - PD-303 spektrofotométerrel, 600 nm-es hullámhosszon, küvettában optikai úthossz 10 mm). A média minden jelenlétében 10-15% NaCl látott gyors növekedés.
Sejteket gyorsan befolyása alatt lizosztafin, de érzéketlen lizozim lépéseket.
Oksidazootritsatelny. Forming savat az oxidációs aerob szacharóz, maltóz, trehalóz, laktóz, galaktóz és fruktóz.
A nitrát-reduktáz nem képeznek acetoin, nem okoz hemolízist, és nem alvadt nyúl szérum; Ők nem lúgos foszfatáz, érzékeny novobiocinnal.
A terméket szintetizáljuk törzs:
A antibakteriális hatása a tenyészet felülúszó Staphylococcus hominis KLP-1 megnyilvánul, ha ezzel egy bakteriális növesztő tápközegben S. epidermidis 33. gátló aktivitása megmarad 60 perc után forrásban felülúszókat. Kezelése felülúszók nukleáz - DNS-áz RNS-áz nincs hatással azok antibakteriális hatása. Miután proteolízis tripszinnel, pepszinnel és proteináz K-antibakteriális aktivitást a tenyészet felülúszójában a termelői teljesen eltűnik. Amikor ultraszűréssel Centricon-3 rendszer (3 kDa, «Amicon») antibakteriális aktivitását a készítmények teljesen kimutatható a ultrafiltrátum. A tények megerősítik a peptid természete tényező, amelynek molekulatömege kisebb, mint 3000 Da.
Egy módszer annak meghatározására antibiotikus aktivitását a tenyészet felülúszójában Staphylococcus hominis KLP-1:
Meghatározása az antibakteriális aktivitás alikvot tenyésztőközegben végeztük immunológiai lemezeken elvét alkalmazó két-szeres hígításokat alikvot táptalajban. A lyukakat a lemez adunk 100 liter folyékony közeg MN. Az első jól sorban 100 ul a vizsgálat a felülúszót, sterilizált forró vízfürdőben 10 percig. Szekvenciálisan átadó 100 l a tartalmát az első kutak sorban az ezt követő két-szeres sorozathígításokat készítettünk 1: 2 és 1: 4096. Ezután minden vájatot adtunk 10 ul szuszpenziót teszt-kultúra S. epidermidis sejtek 33 tartalmazó június 10 CFU / ml. A hatékonyságot úgy értékeljük ki, a gátló hatás a 16-18 órás inkubálása A lemezeket 37 ° C-on A hagyományos egység antibakteriális aktivitással vevő tényező reciproka a maximális hígítás, melyen nem volt a növekedés teljes gátlását a vizsgált baktériumok és vannak kifejezve tevékenységét (EA) / ml.
Az eljárás körülményeitől és a készítmény a médiára a törzs: A laboratóriumban törzs MN tárolt ferde agaron vetés után hurok a folyékony inokulum. Reseeding friss MH agar végezzük 3 havonta.
A liofilizált sejteket a törzs szacharózzselatin agart használunk, mint krioprotektív tartalmazó 10% szacharózt, 1,5% zselatint és 0,1% agar. Vizsgálata termelés a antibakteriális peptid liofilizálás után törzs mutatta, teljes megtartása ezt a funkciót, amikor növesztjük folyékony közegben.
Alkoholfogyasztás fág: baktérium törzs érzékenységét fágok vizsgáltuk bankfiókban szövetségi állam Egységes Enterprise „Microgen” NPO „Biomed” (Perm). Strain S. hominis KLP-1 lizált tipikus fág I, II, III, V és csoportok vnegruppovymi fágok, valamint specifikus bakteriofág titerű 10 -3 Gracia módszerrel.
Genetikai jellemzők: antibiotikochuvstvitelnosti törzset vizsgáltuk szokásos módszerrel, szabványos tartalmazó korong eltérő hatásmechanizmusú antibiotikumok. Elszámolása gátolta a bakteriális gyep növekedési zónák után végeztük 18 órán át.
Az átlagos átmérője gátlási zóna mm-ben:
Ampicillin - 15; oxacillin - 18; Gentamicin - 9; kloramfenikol - 10; linkomicin - 32; rifampicin - 36; tetraciklin - 16; fuzidin - 28; eritromicin - 10; - cefalexin 23; ciprofloxacin - 26; A vancomycin - 18.
A lehetőségét, hogy a találmány szerinti példákkal illusztráljuk, amelyek nem korlátozzák a körét és szellemét az igénypontokban azzal kapcsolatos.
Antibakteriális hatása felülúszók a táptalaj Staphylococcus hominis KLP-1 az 1. táblázatban látható.
Így a kapott termelő törzs egy alacsony molekulatömegű, peptid vegyületek, amelyek antibakteriális aktivitással széles spektruma ellen a Gram-pozitív mikroorganizmusok. A törzset jellemzi a magas szintű Ezen vegyületek előállítását az elérése 1024000 ETE 1 liter tápközegben tenyésztve folyékony tápközegben.
KÖVETELÉSEK
A törzs Staphylococcus hominis KLP-1, lerakódik a gyűjtemény GNIISKMPB őket. Tarasevich számozott 284, - termelő alacsony molekulatömegű, peptid vegyületek, amelyek gátolják a fejlődését Gram-pozitív baktériumok ellen.
Magyarország szabadalmak osztályba C12P21 / 00:
