komplement-fixálás (RSK)

RAC magas érzékenysége és specificitása, és használják:

1) szerológiai diagnosztizálására fertőző betegségek (p Wasserman - szifilisz, p Bordet-Gengou - krónikus gonorrhoea stb.) ..;.

2) azonosítunk egy baktérium és mások. Mikrobák.

RGC kifejezés egy összetett szerológiai reakciókat érintő eltérő AG és AT További hemolitikus rendszer (p. A hemolízis), hogy feltárja az eredménye a reakció.

DGC végzett két szakaszban, amelyben részt vesznek a két rendszer:

1) Az első rendszer - K + AT + kiegészítse - okok kiegészítik kötelező az esetben, ha megfelel az AT AG. Abban az esetben, következetlenségek és az AH komplement szabad marad;

egy második rendszer (indikátor) - gemolitecheskaya szérum (hemolizin) + eritrociták - eredményét mutatja be a reakció az első rendszer: abban az esetben pozitív reakciót az első rendszer (komplex képződését AH + AT + kiegészíti) a második rendszer nem fordulnak elő hemolízis miatt a komplement hiányában (eritrociták ülepedni alján a cső). Abban az esetben, negatív eredményt az első rendszer kíséri egy második hemolízis, t. K. Komplexben eritrociták hemolizinek + + komplement (lásd. App. 3, ábra a 7. és 8. ábra).

1) Vizsgálandó szérumok (előzőleg hővel inaktiváltuk 56 0 C-on 30 percig);

2) antigén (készült szuszpenziók megölt mikrobiális lizátumok mikrobák teljes AG, haptének, szöveti kivonatok lipidek);

4) Szérum hemolitikus;

5) 3% -os szuszpenzió birka vörösvérsejtek;

6) sóoldat;

7) kontroll szérumokat.

Kiegészítik. B tartalmazza a legnagyobb mennyiségben, és mindig jelen van, mint mások. Állatok kiegészítéseként az RNC szárítjuk és használt friss szérum tengerimalac, t. K. A vérben tengerimalac komplement. Behelyezés előtt DGC titrálás kell végezni a komplement hemolízis reakció (birka eritrociták, hemolitikus szérum komplement, Phys. Solution) és egy munkadefiníciót dózis.

A titer komplement - az a legnagyobb hígítás okozó teljes komplementere, amely az eritrociták roncsolásával a szérum jelenlétében hemolitikus.

Munka dózis-kiegészítő - Komplement szám, amely nagyobb, 25% -kal Tir.

A hemolitikus előállítására szérum immunizálunk nyulak egy 50% birka vörösvértest-szuszpenzióval. A kapott szérumot hővel inaktiváltuk 56 0 C-on határozzuk meg a titer a dolgozó és az adagolást.

Szérum titer - a maximális szérum hígítást ami összesen az eritrociták roncsolásával a komplement jelenlétében. A dolgozó adag szedési szérum hemolitikus titer a hármas.

A reakciót, amelyben az diagnosztizálására krónikus gonorrhoea elleni antitestek kimutatására gonokokkuszt.

Az RNC 2 rendszer részt: az alap-rendszer - A vizsgálati szérum, az antigén, kiegészíti és támogatja, jelző vagy hemolitikus rendszer - Szérum hemolitikus eritrociták és juhok.

Ha az elsődleges rendszer által generált egy antigén specifikus antitest +, a komplement adszorbeált (kötődik e komplex), és a második rendszerben hemolízis történik.

A reakcióhoz szükség:

1. A teszt szérum vérből kapott húzott felszúrásával könyökvénába a beteg. Alvadás után a szérumot szívja be egy külön csőbe, és inaktiválódik 30 percen át 56 0 C-os vízfürdőbe.

2. Az antigén - felfüggesztése megölt gonococcusok.

3. A birka-vörösvérsejtek nyert steril fibrin mentesített vért vettünk. Ezeket centrifugálással mossuk 3-szor új sóoldattal részletben. A reakcióban egy 3% -os szuszpenzió vörös vérsejtek.

4. A hemolitikus szérumot készítettünk előzetesen immunizálásával nyulakat birka vörösvérsejtekkel. Használata előtt készült szérum titrálással.

5. Komplement - friss tengerimalac szérum. A szív a tengerimalac fecskendő nasasyvayut véralvadás után a szérumot elválasztjuk. A kísérlet előtt az adagot vytitrovyvaetsya dolgozó kiegészítője. Ehhez, hogy a fő komplement 1:10 hígításban, és öntjük kémcsövekbe, 0,1-0,5, ami után a végtérfogata mindegyik csőbe állítjuk be fiziológiás sóoldattal 1,5 ml.

Egyidejűleg betakarított haemolyticus rendszer - hígított hármas hemolitikus titer szérum + 3% birka vörösvértest-szuszpenzióval. Az összetevők a különböző mennyiségű és 30 percig inkubáljuk (szenzibilizáló keverék), majd a keveréket hozzáadjuk 1 ml-csövekbe inkubátorba helyeztük 30 percig. A kontroll csövek 3:

1. 1 ml hemolitikus rendszer + 1,5 ml fiziológiás sóoldattal;

2. 0,5 ml kiegészítik 01:10 + 0,5 ml eritrocita-szuszpenziót + 1,5 ml fiziológiás sóoldattal.

Titere komplement nevezte minimális számát, amelyben van még hemolízis. A reakciók döntéseket dolgozik komplement dózis, megnövekedett titerét szemben 20-25% r. E. száma általában komplement amelynek utolsó előtti vitro hemolízis. Dózisának növelése komplement azért szükséges, mert a reakció aktivitása komplement lehet kissé elnyomta a többi összetevő a reakció (antigén szérum).

Készítmény alapvető tapasztalata DGC Bordet - Gengou.

Korai palackozott fiolákba 2 és inaktivált elvált 1: 5 vizsgálandó szérum. Ezután az 1. csőbe öntjük antigén másodsorban sóoldatban. Ezt követően, a munka dózis komplement adtunk minden csövekbe.

Miután az összetevők összekeverése állvány csöveket inkubátorba helyezzük 37 0 C-on 30 percig (meleg kötés). A hideg kötődési állvány csövek helyezzük gleccser -4 0 ° C-on 18 órán át. Az inkubálás után a hemolitikus rendszert adunk az összes csövek. A reakciót helyezzük 0,5 ml térfogatban. A csöveket ismét inkubátorba helyezzük 2 órán át, és ezután előzetes regisztrációs eredményeket. A fiolákat maradhat szobahőmérsékleten, és a következő napon jelzett a végeredményt.

A reakció mértéke intenzitásának becsült pluses. Hemolízis késleltetés - négy pluses (++++), rész-idő - három és egy plusz. Teljes hemolízis jelzett mínusz (-).

Ez áll a diagnózis a szifilisz ellenanyagok kimutatása érdekében és hatékonyságának meghatározására specifikus terápiák. Ennek alapja az az elv, a komplement fixálás Bordet-Zhang. Az alapvető különbség a Wassermann reakció nem specifikus antigén: használni, mint antigént lipoid kivonat állati szervekből származó normális.

Ahhoz, hogy a kar Wasserman kell egy a páciens szérumában, diagnosztikus antigének kereszt-reaktív № № 1 és 2, komplement hemolitikus szérum, birka eritrociták, sóoldat.

Diagnosticum № 1 - specifikus, treponemális.

Diagnosticum №2 - nem specifikus, kardiolipin antigénnel, amelyek nagymértékben tisztított kivonatot szarvasmarha szív, amelynek állandó kémiai összetétele lipidek. Kivont lipidek a szív, a kémiai összetétele közel lipoid Treponema pallidum, így bár ez nem specifikus, de elleni antitestek rögzített spirocheták. Ezek az antigének központilag és a reakcióban használt hígítjuk szerint titer a címkén feltüntetett.

Ezzel párhuzamosan, a fő vezérlő kísérlet 2: egyértelműen negatív és pozitív szérumok nyitni.